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Q-1:使用RNAiso Blood得到的RNA收量少,为什么?
A-1:RNA收量因样品不同而不同。利用RNAiso Blood从0.25 ml液体样品或50 mg含水量较高的植物中所能提取的RNA量如下表:
组织材料 起始样品量 Total RNA提取量
人全血 0.25 ml 1~10 μg
小鼠全血 0.25 ml 1~10 μg
牛全血 0.25 ml 1~10 μg
鲤鱼全血 0.25 ml 10~100 μg
菠菜叶片 50 mg 30~60 μg
西红柿果实 50 mg 1~10 μg
橘子 50 mg 1~10 μg
如果收量少于预期,可能由于以下原因:
a、加入RNAiso Blood后匀浆不充分;
b、三相分层时,上清液取量过少;
c、RNA沉淀没有完全溶解;
d、在异丙醇沉淀或清洗时存在RNase污染;
e、在异丙醇沉淀或清洗时RNA沉淀流失;
·异丙醇沉淀时建议使用Dr.GenTLE® Precipitation Carrier(Code No. 9094)
f、水分含量少的组织样品,没有经过稀释直接使用RNAiso Blood进行了RNA提取。
·水分含量少的组织样品,添加RNA-free水使样品体积至0.25 ml,再加入RNAiso Blood进行RNA提取。
Q-2:使用RNAiso Blood得到的RNA,OD260/OD280值<1.65?
A-2:

1.RNA应使用TE Buffer稀释后再进行吸光度值的测定,低离子强度或低pH值会使OD280值升高。
2.样品加入RNAiso Blood经匀浆后,在室温静置5分钟,这一步是从核酸中分离核蛋白的重要步骤。
3.吸取上清液时,注意枪头不要接触中间蛋白质层。
4.提取的RNA未充分溶解。

Q-3:使用RNAiso Blood得到的RNA不溶解,为什么?
A-3:

1.若75%乙醇清洗沉淀后干燥时间过长,则RNA沉淀会难以溶解。避免加热或长时间干燥沉淀。
2.可以于60℃加热5分钟后再于冰上溶解数小时可有助于沉淀溶解。

Q-4:使用RNAiso Blood提取的RNA已降解,为什么?
A-4:

1.RNA提取用样品,应采用新鲜的组织材料,或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。
2.提取RNA时使用的样品及器皿中混有RNA分解酶。

Q-5:使用RNAiso Blood提取的RNA中有DNA污染,为什么?
A-5:

1.使用的样品中含有大量的有机溶剂(如:乙醇、异丙醇等)、高浓度的缓冲液、碱性溶剂等。
2.如果提取的RNA中含有DNA时,可以使用Recombinant DNase I (RNase-free)(Code No. 2270A)进行DNA消化。

Q-6:提取的RNA中含有多糖怎么办?
A-6:

对于从含有大量多糖的植物样本中提取RNA时,建议使用Fruit-mate for RNA Purification (Code No. 9192)作为预处理试剂。在异丙醇沉淀纯化步骤中加入High-Salt Solution for Precipitation(Plant)(Code No. 9193)可有效除去RNA溶液中的多糖。

页面更新:2020-05-06 10:18:04

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